实验指导书：《临床物化学检验技术实验指导》，倪培华主编，

第1版，人民卫生出版社，2015年3月

编写单位：临床生物化学实验室

《临床生物化学及检验》实验教学大纲

课程编码：20502020

课程名称：临床生物化学和生物化学检验

实验指导书：临床生物化学检验技术实验指导（第一版）

参考教材：临床生物化学检验技术（第一版）

总学时：118学时

理论学时：46学时

实验学时：72学时

适应专业：医学检验专业

一、实验教学目的与基本要求

      临床生物化学检验是化学、生物化学与临床医学相结合的一门边缘应用学科。临床生物化学检验是将化学的原理和技术应用于生物体液成分的测定，为临床提供客观的诊断依据，并为监测疾病的发展和治疗效果提供可靠的指标。临床生物化学及生物化学检验是医学检验专业的主干课程。

      开设实验课的目的：

1、加深学生对临床生化检验领域的理解，使学生将理性知识与感性知识有机的结合；

2、通过教师启发式的教学，培养学生严谨的工作态度，仔细和正规的操作方法，科学和敏捷的操作思路，为今后的临床生产实习打下扎实的基础。

3、通过实验以及对实验结果地评价和分析培养学生分析问题和解决问题地能力。

4、通过实验课树立学生提高临床诊断水平，为临床服务的意识，加强学生能力的培养及创新思维和能力的训练。

     本实验课的基本要求：

1、使学生掌握临床生化检验中常用的技术、检测指标数据的处理和分析方法及与临床的关系。

2、掌握常见的临床生化检验项目测定的原理、操作要求、注意事项、方法学评价及临床意义。包括：蛋白类、糖类、无机离子、酶类、肝功能、非蛋白含氮化合物、血脂、血气及酸碱分析等。

二、学时安排

实 验 名 称                                      实验类型 实验要求 学时

二乙酰一钨法测定血清尿素                   验证性 必开        4

赖氏法测定血清ALT                             验证性 必开        4  

回收实验、干扰实验                            研究性  必开        6

方法比较实验                                     研究性  必开        4

线性范围试验                                     研究性  必开        4

磷钨酸-镁法测定HDL-ch                       验证性  必开        4

血气分析仪的使用                               验证性  必开        4 

荧光分光光度法测定血清镁                   验证性  必开        4

磷酸甘油氧化酶法测定血清TG               验证性  必开        4

磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶    验证性 必开        4

分离纯化小麦胚芽中的酸性磷酸酶          创新性 必开        8

酶蛋白含量测定及比活性分析                创新性 必开        8

酸性磷酸酶时间进程曲线                      创新性 必开        3

酸性磷酸酶浓度速度曲线                      创新性 必开        3  

实验考试                                           验证性 必开        4

实验强化培训                                               必开        4

总计 72

三、考核

考核方式：选用多个小项目的实验操作作为实验考试内容，通过观察学生的实验操作、动手能力、实验结果等项分别来记分。

成绩构成：理论考试60%，实验考试15%，平时实验项目占25%，包括平时成绩5%，实验报告20%。

四、实验课程基本内容

二乙酰一钨法测定血清尿素

〖目的要求〗

1、掌握二乙酰一肟法测定血清尿素的操作技术与原理。

2、熟悉二乙酰一肟法测定血清尿素的临床意义。

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀沸水浴加热12分钟后取出再冷水浴5分钟后，再用分光光度计处λ＝540nm处比色测各管A值。

3、根据公式计算结果。

赖氏法测定血清ALT

〖目的要求〗

1、掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的操作技术与原理。

2、熟悉赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的临床意义。

〖主要内容〗

1、ALT校正曲线绘制：按表加样操作，得出数据，绘制校正曲线。

2、标本的测定：按表加校后混匀后室温放置5分钟后，再用分光光度计处λ＝505nm处蒸馏水调零比色测各管A值。

3、根据测定管吸光度减去样本对照管吸光度的差值为标本的吸光度，该值在校正曲线上查得ALT的卡门氏单位。

回收试验、干扰试验

〖目的要求〗

1、掌握回收、干扰试验原理。

2、熟悉回收、干扰试验方法评价

〖主要内容〗

1、按要求制备标本，回收试验血清浓度为2.2mmmol/l，干扰试验血清浓度为6.5mmmol/l。

2、根据GOD-POD法测定各标本血糖浓度，按要求加样。

3、混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管A值。

4、根据各计算公式得出回收率、干扰率、回收浓度、干扰浓度。

5、对结果进行讨论分析。

方法比较试验

〖目的要求〗

1、掌握方法比较试验原理。

2、熟悉方法比较试验方法学评价。

〖主要内容〗

1、用GOD-POD法测定两种不同浓度血清标本血糖浓度，按要求加样。

2. 混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管A值。

3、再用邻甲苯胺法测定原GOD-POD法所用标本血糖浓度，按要求加样。

4、混匀后，置沸水浴中煮沸5分钟后，取出再冷水浴5分钟后，再用分光光度计处λ＝630nm处比色测各管A值。

5、集合全组同学数据，用直线回归分析法进行统计学处理，得出回归方程y=a+bx及相关系数r。

6、根据回归方程及相关系数对被评价实验进行分析评价。

线性范围试验

〖目的要求〗

1、掌握线性范围的操作技术与原理。

2、掌握线性范围的数据处理。

〖主要内容〗

1、用GOD-POD法测定血清标本血糖浓度，按要求加样。

2、混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管A值。先从低浓度往高浓度测一次，再从高到低再测一次，记下数据。

3、数据处理，描散点图。

4、方法学评价分析。

磷钨酸-镁法测定HDL-ch

〖目的要求〗

1、掌握磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇的操作技术与原理。

2、熟悉磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇的临床意义。

〖主要内容〗

1、取血清标本和沉淀剂，充分混匀置室温10分钟后3000转离心15分钟，吸取上清液进行下一步操作。

2、按要求加样，混匀37度水浴5-10分钟后，再用分光光度计处λ＝546nm处比色测各管A

3、根据公式求出标本中HDL－ch浓度。

血气分析仪的使用

〖目的要求〗

1、掌握血气分析仪的操作与原理。

2、熟悉血气分析的常用指标临床意义。

〖主要内容〗

1、讲解各指标意义

2、血气分析原理

3、练习使用血气分析仪。

荧光光度法测定血清镁

〖目的要求〗

1、掌握荧光光度法测定血清镁的原理。

2、熟悉荧光光度法测定血清镁的临床意义。

〖主要内容〗

1、按表进行标准A、B管的加样操作

2、混匀，用力振摇2分钟，离心10min。取上清液进行荧光测定。激发波长440nm，发射波长580nm。用各自A管调零，读取相应B管的荧光强度。

3、依据公式进行计算。

磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三脂

〖目的要求〗

1、磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三脂的原理。

2、磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三脂的方法及临床意义。

〖主要内容〗

1、取血清标本按要求加样。

2、混匀37度水浴5-10分钟后，再用分光光度计处λ＝546nm处比色测各管A

3、根据公式求出标本中血清甘油三脂浓度。

磷酸苯二钠比色法测定法测定血清碱性磷酸酶

〖目的要求〗

1、掌握磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的操作技术与原理。

2、熟悉磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的临床意义。

〖主要内容〗

1、先用标准管按要求加样，

2、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测各管A值。

3、根据标准管与各管对应A值绘制标准曲线。

4、血清标本中ALP的测定，按要求加样。

5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测A值。

6、利用标准曲线找出标本对应酶活力单位。

小麦胚芽中酸性磷酸酶的分离纯化

〖目的要求〗

1、掌握分离纯化小麦胚芽中酸性磷酸酶的原理。

2、熟悉分离纯化小麦胚芽中酸性磷酸酶的操作方法。

〖主要内容〗

1、小麦胚芽的准备：新鲜小麦浸泡4小时后洒水放篓中盖双层纱布，2-3天后剪麦芽备用。

2、用离速冷冻离心机，依次按要求加样离心取上清液，记录体积。

3、数据处理。

酶蛋白含量测定及比活性分析

〖目的要求〗

1、掌握酶蛋白含量测定及比活性分析的原理。

2、酶蛋白含量测定及比活性分析的操作方法。

〖主要内容〗

酶蛋白含量测定：

1、先用标准管按要求加样

2、立即混匀，室温放置2分钟，再用分光光度计处λ＝595nm处比色测各管A值。

3、根据标准管蛋白质浓度为横坐标，各管对应A值为纵座标，绘制标准曲线。

4、测定各上清液中蛋白质含量，按要求加样。

5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝595nm处比色测A值。

6、利用标准曲线在曲线上找出各上清液所对应的蛋白质含量。

酶活性测定及比活性分析：

1、先做标准管按要求加样

2、立即混匀，室温放置10分钟，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测各管A值。

3、根据标准管酶含量为横坐标，各管对应A值为纵座标，绘制标准曲线。

4、测定各上清液中酶含量，按要求加样。

5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测A值。

6、利用标准曲线在曲线上找出各上清液所对应的酶含量。

酸性磷酸酶时间进程曲线

〖目的要求〗

1、掌握酸性磷酸酶时间进程曲线的原理。

2、熟悉酸性磷酸酶时间进程曲线的制作过程。

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀，室温放置10min，以“1”管调零，在波长510nm处测得各管吸光度值。3、绘制时间进程曲线：以时间(t)为横坐标，各管吸光度值的平均值(A)为纵坐标，绘制时间进程曲线，从曲线上找出酶促反应初速度的时间范围。

酸性磷酸酶浓度速度曲线

〖目的要求〗

1、掌握酶活性测定中酶浓度的选择原则

2、熟悉酸性磷酸酶浓度速度曲线的制作过程

3、了解酶促反应速度与酶浓度的关系

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀，室温放置10min，以“1”管调零，在波长510nm处测得各管吸光度值。

3、绘制浓度速度曲线：以蛋白质含量（μg）为横坐标，各管吸光度值平均值（A）为纵坐标绘制[E]-A曲线，求出呈直线的A值范围。

实验考试

〖目的要求〗

1、掌握吸量管、移液枪、离心技术、电泳技术基本的操作。

2、熟悉本学期开设过的实验项目的原理。

〖主要内容〗

1、按表进行加样操作：观察学生移液枪、吸量管的使用情况。

2、离心技术：离心机选择、离心要点及注意事项；

3、电泳技术：电泳时点样的要点及注意事项、点样端正负极的摆放。

4、分光光度计的使用、平行管的结果。

实验强化训练

〖目的要求〗

1、掌握生化四大常规技术的操作。

2、掌握临床生化检验常用的基本技能操作。

〖主要内容〗

1、吸量管、移液枪等常用器具的使用练习。

2、临床生化实验室常用的仪器使用。

3、离心机、分光光度计、电泳仪电泳槽的使用。