实验指导书：《临床分子生物学检验技术实验指导》，王晓春主编，第一版，人民卫生出版社，2015年4月

编写单位：临床生物化学实验室

《分子诊断学》实验教学大纲

课程编码：20502030

课程名称：分子诊断学

实验指导书：临床分子生物学检验技术实验指导

参考教材：临床分子生物学检验技术

总学时：60学时

理论学时：30学时

实验学时：30学时

适应专业：医学检验专业

一、实验教学目的与基本要求

实验教学目的：分子诊断学是临床检验诊断学的一个重要分支，它利用分子生物学技术来研究机体外源性和内源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变，从而为疾病的预测、预防、诊治和转归提供分子水平信息。利用基础医学及生命科学的理论和方法，阐明疾病发生、发展及转归的分子机制，为疾病进程的各阶段探寻准确、特异的分子诊断指村，运用分子生物学技术为分子诊断建立实用可靠的检测方法。

实验基本要求：分子诊断学实验课着重于对学生科研能力的培养及创新思维和能力的训练。使学生掌握分子诊断学常用的PCR技术及生物大分子的分离纯化技术，使学生了解分子诊断学的基础理论、技术方法和临床应用，充分了解分子诊断学的发展趋势。培养学生严谨的工作态度，仔细和正规的操作方法，科学和敏捷的操作思路，为今后的临床生产实习打下扎实的基础。

二、学时安排

项目名称 实验类型 实验要求 实验学时 备注

PCR扩增检测乙肝病毒 验证性 必开 4

外周血白细胞中DNA的提取及测定 验证性 必开 8

质粒的提取 综合性 必开 6

限制性核酸内切酶消化质粒DNA 综合性 必开 4

细胞的转化 综合性 必开 8

总计 30

三、考核

考核方式：理论考试笔试，实验课采用平时考核与实验报告的书写等项来记分。

成绩构成：理论考试70%，本实验课占30%。

四、实验课程基本内容

PCR扩增检测乙肝病毒：

〖目的要求〗

1、掌握PCR扩增HBV的原理

2、熟悉PCR扩增HBV的方法

3、掌握整个过程的操作步骤

〖主要内容〗

1.标本处理

2.PCR反应

3.电泳检测

外周血白细胞中DNA的提取及测定

〖目的要求〗

1、掌握真核细胞中DNA提取的原理

2、熟悉从外周血白细胞中提取DNA的方法

3、掌握整个过程的操作步骤

〖主要内容〗

1、破碎细胞

2、DNA的提取

3、沉淀DNA

4、DNA纯度的定性测定：电泳后在紫外分析仪下观察条带。

质粒的提取

〖目的要求〗

1、掌握掌握碱裂解法提取质粒的原理；

2、掌握碱裂解法提取质粒的方法。

〖主要内容〗

1、菌株培养：培养细菌使质粒扩增

2、细菌的收获：

3、细菌的裂解

4、中和

5、沉淀DNA

6、电泳检测

限制性核酸内切酶消化质粒DNA

〖目的要求〗

1、掌握限制性核酸内切酶消化质粒DNA的原理与方法。

2、了解酶切反应条件。

〖主要内容〗

1.标本处理

2.37度酶切，60度终止反应

3.电泳检测

4.结果观察。

细胞的转化

〖目的要求〗

1、感受态细胞的制备；

2、质粒转化入大肠杆菌

3、转化子的初步筛选

〖主要内容〗

1、感受态细胞制备：按操作步骤进行

2、重组体转化：按操作步骤进行

3、重组体的筛选：蓝白斑实验