实验指导书：1、实验指导书：《临床物化学检验技术实验指导》，倪培华主编，第1版，人民卫生出版社，2015年3月

2、《长沙医学院生物化学实验指导》，陈正炎主编，自编，2009年

编写单位：临床生物化学实验室

《生物化学》实验教学大纲

课程编码：20502010

课程名称：生物化学

实验指导书：临床生物化学检验技术实验指导（第一版）、

生物化学实验指导（自编）

参考教材：生物化学与分子生物学（第八版）

总学时：104学时

理论学时：60学时

实验学时：44学时

适应专业：医学检验专业

一、实验教学目的与基本要求

生物化学是研究生物体的化学组成和生命过程中化学变化规律的科学。它主要采用化学以及物理学和免疫学等原理和方法，从分子水平来探讨生命现象的本质。生物化学已深入了分子水平，称分子生物化学。生物化学既是重要的基础医学学科，又与其它基础医学学科有着广泛的联系与交叉。生物化学是医学检验专业的专业基础课。

开设实验课的目的：

1、理论与实践相结合，基础与临床相结合，使学生将理性知识与感性知识有机的结合。

2、通过教师启发式的教学，培养学生严谨的工作态度，仔细和正规的操作方法，科学和敏捷的操作思路，为今后的临床生产实习打下扎实的基础。

3、通过实验以及对实验结果地评价和分析培养学生分析问题和解决问题地能力。

4、通过实验课树立学生提高临床诊断水平，为临床服务的意识，加强学生能力的培养及创新思维和能力的训练。

本实验课基本要求：

1、通过实验课，着重于对学生能力的培养及创新思维和能力的训练。

2、使学生掌握生物化学中常用的技术、数据的处理和分析方法及与临床的关系。

3、掌握吸量管、移液器、离心机、水浴箱、混匀器、匀浆器、紫外分光度计、722型分光光度计、荧光分光光度计等一般仪器的操作，熟悉各种层析技术（HPLC、GE、离子交换、亲和层析、凝胶层析）的操作过程；掌握主要电泳技术（醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳、PAGE）的操作过程及注意事项；了解离心技术的临床应用。

4、掌握生物化学实验项目测定的原理、操作要求、注意事项、方法学评价及临床意义。

二、学时安排

实 验 名 称 实验类型 实验要求 学 时

实验室基本技能操作训练 验证性 必开 4

硫酸铜溶液标准曲线绘制 验证性 必开 4

双缩脲法测定血清总蛋白 验证性 必开 2

紫外分光光度法测定血清蛋白质 验证性 必开 2

溴甲酚绿法测定血清白蛋白 验证性 必开 4

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 综合性 必开 6

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 综合性 必开 12

凝胶过滤法分离高铁血红蛋白和高铁氰化钾 验证性 必开 4

琼脂糖电泳测定LDH同工酶 验证性 必开 6

总计 44

三、考核

考核方式：通过实验操作、实验结果与实验报告的书写等项来记分。

成绩构成：理论考试80%，本实验课占30%，包括平时成绩5%，实验报告20%，实验考试5%。

四、实验课程基本内容

实验室基本技能操作训练

〖目的要求〗

1、掌握：吸量管、移液枪的正确使用

2、熟悉：玻璃仪器的洗涤

〖主要内容〗

1、学习吸量管的操作

2、学习移液枪的使用

3、学习玻璃仪器的洗涤：可以用毛刷刷洗的玻璃仪器的洗涤法，新购置容器的洗涤，装有传染样品的容器的洗涤，比色杯的洗涤。

4、分配玻璃仪器并清洗。

5、常用生化实验样品的制备

硫酸铜溶液标准曲线绘制

〖目的要求〗

1、掌握：硫酸铜溶液标准曲线的绘制。

2、熟悉：实验操作方法。

3、掌握：分光光度计的使用。

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀后，再用分光光度计处λ＝630nm处比色测各管A值。

3、根据标准管浓度与A值绘制标准曲线。

4、利用标准曲线找出标本对应浓度。

5、利用郎伯比尔定律，根据公式求出硫酸铜溶液浓度。

双缩脲法测定血清总蛋白

〖目的要求〗

1、掌握：双缩脲法测定血清总蛋白质的原理

2、熟悉：该方法的操作

3、了解：临床意义

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀后，置25度30分钟，或37度水浴箱中10分钟，再用分光光度计处λ＝540nm处比色测各管A值。

3、利用郎伯比尔定律，根据公式求出血清中蛋白质浓度。

4、临床意义及方法学评价。

紫外分光光度法测定血清蛋白质

〖目的要求〗

1、掌握：紫外分光光度法测定血清蛋白质的原理。

2、熟悉：测定方法。

3、掌握：紫外分光光度计的使用。

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀后，再用紫外分光光度计分别测λ＝280nm和λ＝260nm处测定管A值。

3、利用郎伯比尔定律，根据公式求出血清中蛋白质浓度。

4、临床意义及方法学评价。

溴甲酚绿法测定血清白蛋白

〖目的要求〗

1、掌握：BCG法测定血清蛋白质的原理。

2、熟悉：操作方法及临意义。

〖主要内容〗

1、按要求加样

2、混匀后，在30秒之内用分光光度计测λ＝628nm各管A值。

3、利用郎伯比尔定律，根据公式求出血清中白蛋白浓度。

4、临床意义及方法学评价。

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质

〖目的要求〗

1、掌握：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理及电泳技术。

2、熟悉：操作方法。

〖主要内容〗

1、泡膜：将标记好的醋酸纤维薄膜毛面朝下浸泡电泳缓冲液中30分钟。

2、点样：毛面朝上，点样品于点样线上。

3、电泳：毛面朝下，纱布搭桥。110V，45分钟。

4、染色：丽春红S染色5分钟。

5、洗脱：7%冰醋酸洗脱三次，每次5分钟。

6、扫描：使用光密度扫描仪

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质

〖目的要求〗

1、掌握：聚丙烯酰胺电泳分离血清蛋白质的原理及电泳技术。

2、熟悉：操作方法

〖主要内容〗

1、制胶：先制备分离胶，再制备浓缩胶。

2、点样：成胶后点样品于胶面上。

3、电泳：浓缩胶上电泳1.5mA/支，分离胶上电泳2.5mA/支。电泳需时间大约三个小时。

4、染色：考马斯亮蓝进行染色。

5、洗脱：冰醋酸洗脱浸泡。

6、扫描：一周后使用光密度扫描仪对结果进行扫描

凝胶过滤法分离高铁血红蛋白和高铁氰化钾

〖目的要求〗

1、掌握：层析技术及实验原理。

2、熟悉：实验操作步骤。

〖主要内容〗

1、凝胶准备：G-25萄聚糖

2、点样：毛面朝上，点样品于点样线上。

3、电泳：毛面朝下，纱布搭桥。110V，45分钟。

4、染色：丽春红S染色5分钟。

5、洗脱：7%冰醋酸洗脱三次，每次5分钟。

6、扫描：使用光密度扫描仪

琼脂糖电泳测定LDH同工酶

〖目的要求〗

1、掌握：琼脂糖电泳分离LDH的原理及电泳技术。

2、熟悉：实验操作步骤。

〖主要内容〗

1、制胶：制备琼脂糖凝胶，铺于洁净玻片上，凝固待用。

2、组织匀浆：兔子内脏－心、肝、肾、肌肉2.5G，剪碎后玻璃匀浆器匀浆。

3、点样：匀浆液离心后取10UL点样于琼脂糖凝胶一端

4、电泳：110V，45分钟。

5、染色：配显示色剂滴于电泳后的凝胶上。37度10分钟。

6、扫描：使用光密度扫描仪对结果进行处理。